神经氨酸酶金
唾液酸酶,NANase,N-乙酰神经氨酸糖水解酶,Exo-α-唾液酸酶
α(2-3,6,8,9)神经氨酸酶Au切割所有复杂的碳水化合物和糖蛋白上的非还原性末端唾液酸残基。不同键的相对裂解率是:
α(2-6)>α(2-3)>α(2-8),α(2-9)。
另外,该酶将裂解分支的唾液酸(连接至内部残基)。该特性使其在神经氨酸酶中具有独特性。裂解分支残基可能需要高浓度的酶和延长的孵育时间。若要仅切割非还原性末端α(2-3)未分支的唾液酸残基,请使用神经氨酸酶SP,部件号E-S007。
α-(2-3,6,8,9)神经氨酸酶分离自脲节杆菌的克隆。使用寡糖标准品已对该酶进行了广泛表征。
源从重组节杆菌在大肠杆菌。
EC 3.2.1.18
20 mM Tris-HCl,25 mM NaCl,pH 7.5中的神经氨酸酶含量
包括20 µL和60 µL的包装尺寸:
5x反应缓冲液250 mM磷酸钠,pH 6.0
比活度> 135 U / mg
活度> 5 U / ml
分子量70,000道尔顿
pH范围4.5-7,最佳6.0
推荐的缓冲液浓缩物为标准底物的酶活性提供了最佳pH。如果由于糖蛋白溶解度或活性要求而在次佳pH下进行糖苷酶处理,则预期酶活性会有所降低。
建议用法
1.向试管中加入最多100μg糖蛋白或1 nmol寡糖。
2.加水至14μL。3
.添加4μL5X反应缓冲液。
4.加入2μLα(2-3、6、8、9)神经氨酸酶。
5.在37°C下孵育1小时。
如果天然和脱唾液酸化蛋白之间的大小差异足以检测,则可以通过SDS-PAGE监测脱唾液酸化作用。
注意:如果存在分支唾液酸,则需要更长的孵育时间。
特异性消除所有非还原性末端支链和直链唾液酸
比活性定义为在37℃,pH 5.0下从MU-NANA [2'-(4-甲基伞形酮)-α-DN-乙酰基神经氨酸]生产1 µmol甲基伞形酮所需的酶量。
存储酶保存在4℃。
纯度如下测试每批α(2-3,6,8,9)神经氨酸酶对蛋白酶的污染。将10μg变性的BSA与2μL酶孵育24小时。经处理的BSA的SDS-PAGE分析未显示降解迹象。
生产宿主菌株已经过广泛测试,不会产生任何可检测的糖苷酶。
稳定性正确存放后至少可稳定12个月。几天暴露于环境温度不会降低活性。酶在37°C下保持活跃至少一周。