唾液酸分析
唾液酸（神经氨酸）通常被发现为N-连接和O-连接的聚糖的末端结构。
唾液酸位于聚糖的末端，是许多糖蛋白相互作用的可能接触点。它们对于糖蛋白的稳定性和3D构象也很重要，并且涉及许多生物学相互作用：
- IgG的唾液酸化降低ADCC并增加抗炎活性
- 神经氨酸通过防止肝脏的去唾液酸糖蛋白受体摄取而增加了糖蛋白的血清半衰期
- NGNA（Neu5Gc）是人类中未发现的一种聚糖，可以引起免疫反应并导致生物药物的中和作用增加。
- 细胞系的选择会极大地影响生物药物上存在的神经氨酸的类型，例如，小鼠IgG上的大部分唾液酸通常是NGNA。
生物制药唾液酸化
生物制药唾液酸化是指神经氨酸在治疗性糖蛋白聚糖中的类型和分布。在产品生命周期的所有阶段中，必须同时监测唾液酸的水平和类型，以确保药物安全性和有效性。
唾液酸化模式可以是制造过程中产品一致性的非常有用的度量。 该聚糖充电曲线中性，一，二，吨的节目分发[1-和四电荷的聚糖。
弱阴离子交换（WAX）-HPLC在LudgerSep-C3色谱柱上分离2AB标记的聚糖的电荷分离。
顶部痕迹（红色）：胎球蛋白N-聚糖。底部痕迹（蓝色）：EPO N-聚糖
寡糖分析
除了电荷分布图，可以通过荧光标记的聚糖的正相分析获得详细的寡糖分布图。
从IgG-1 mAb释放的普鲁卡因酰胺标记的N-聚糖的HILIC-UPLC谱图。通过糖苷外切酶测序和质谱确定结构
唾液酸表征
在自然界中发现了各种各样的唾液酸，但是在哺乳动物表达系统中生产的生物药物中发现的两种主要类型的神经氨酸残基是N-乙酰神经氨酸（Neu5Ac或NANA）和N-羟乙酰神经氨酸（Neu5Gc或NGNA），具有羟基取代了乙酰基。
在EPO和其他人糖蛋白上发现了具有额外乙酰基的Neu5,9Ac2。O-乙酰化唾液酸可以改变配体相互作用并影响治疗性糖蛋白的降解。
该LudgerTag DMB标记试剂盒包含了所有需要释放的试剂，标签，识别和定量唾液酸。
EPO中DMB标记的唾液酸的鉴定和定量。LudgerSep-R1 HPLC色谱柱分析
包含在试剂盒的标准：
唾液酸参考面板
的Neu5Ac -quantitative
的Neu5Gc -quantitative
（Neu5,9Ac2单独提供）
唾液酸的释放糖蛋白中唾液酸的释放是通过温和的酸水解而发生的。将样品和对照在80°C下与2M乙酸孵育2小时。
唾液酸标记反应用1,2-二氨基-4,5-亚甲基二氧基苯-2HCl（DMB）对释放的唾液酸进行荧光标记。酸水解的样品和过程控制以及Ludger唾液酸标准液：Neu5Ac，Neu5Gc，唾液酸参考板和Neu5,9Ac2（如果使用）在50°C下与DMB孵育3小时。
通过HPLC或UHPLC分析使用Neu5Ac和Neu5Gc标准物计算标准曲线。唾液酸参考板和Neu5,9Ac2用于鉴定唾液酸。可以使用适用于HPLC的LudgerSep R1x150mm色谱柱或使用LudgerSep uR2x100mm色谱柱的UHPLC进行分析。
NANA vs NGNA-量化是关键
对于生物制造商而言，控制Neu5Ac（NANA）与Neu5Gc（NGNA）的比例至关重要：人类无法合成Neu5Gc，其在药物上的存在会导致免疫反应，例如慢性炎症。
已在正常人血清中检测到抗Neu5Gc抗体，该抗体可中和任何含有Neu5Gc的生物药物，从而降低了药物的功效。
LudgerTag DMB标记试剂盒可定量Neu5Ac和Neu5Gc。两种单糖是NIST-F和USP可追溯的定量标准。将样品中Neu5Ac和Neu5Gc的峰面积与标准曲线进行比较，以提供有关样品中和过程控制中唾液酸含量的定量数据
小鼠和人IgG中DMB标记的Neu5Ac和Nue5Gc的鉴定和定量。LudgerSep-R1 HPLC柱的分析。