单糖分析

单糖分析是ICH Q6B指南中对生物药物进行表征的法规要求。该信息可以在药物开发的所有阶段用作确定糖基化类型（N联和/或O联）和糖基化发生程度的方法。它也可以用来演示在制造过程中质量控制批次发布的批次之间的一致性。

一个LudgerTag单糖分析试剂盒包含试剂，用于在两组试剂中释放和标记多达96个单独的分析样品，分为两组试剂（每组48个样品）。通常，每个样品分析50微克糖蛋白。

单糖分析的方法如下：
1.通过温和的酸水解从糖蛋白中释放单糖。
2.用2-氨基苯甲酸（2AA）荧光标记释放的单糖。
3.通过HPLC或UHPLC对2AA标记的单糖进行相对定量分析

该试剂盒还包含LudgerTag MonoMix，这是一种单糖标准品，其中含有葡萄糖胺，半乳糖胺，半乳糖，甘露糖和岩藻糖。包含木糖用作内标。

提供了两种水解酸。2摩尔三氟乙酸（2M TFA）和6摩尔盐酸（6M HCl）。2M TFA可以释放中性单糖，但对于我们建议使用6M HCl的N-乙酰氨基葡萄糖（GlcNAc）和N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）单糖效果较差。我们建议将这些酸分别用于样品的复制品。

LudgerTag释放试剂
三氟乙酸– 2M TFA
盐酸– 6M HCl

LudgerTag单糖分析定量标准
品MonoMix单糖标准品–葡萄糖胺，半乳糖胺，半乳糖，甘露糖和岩藻糖各10纳摩尔。
木糖标准品– 100 nmols –用作内部参考标准品，用于准确定量

我们还建议使用纯化的糖肽标准品。Ludger已开发出定量标准（BQ-GPEP-A2G2S2-10U），是一种复杂的双天线N-联聚糖，终止于两个N-乙酰神经氨酸。使用该标准品将使您能够检查聚糖释放，标记和回收的效率，并使您对单糖测量的准确性充满信心。

HPLC –标记单糖的定量分析根据
您在实验室中使用HPLC还是UHPLC系统，我们提供两种色谱柱供您选择。如果使用HPLC，则LudgerSep R2色谱柱（目录号LS-R2-4.6×150）可很好地分离大多数N-连接和O-连接聚糖中发现的七个主要单糖。如果您有UHPLC系统，我们建议使用LudgerSep uR2色谱柱（目录号LS-UR2-2.1×50），每个样品可以进行8分钟的分离。

溶剂：本指南中的聚糖分析梯度基于以下溶剂：
溶剂A：BPT溶剂– 0.2％丁胺（每升2 mL），0.5％磷酸，每升5 mL磷酸，0.5％的纯净水基溶剂（每升10毫升）。
溶剂B：50％乙腈：50％溶剂A